梁山伯自幼與寡母相依為命，讀書勤奮，且生性樂善助人，赴杭城尼山書院求學(xué)。而祝公遠(yuǎn)則獨(dú)霸一方，其女祝英臺(tái)不僅聰穎敏慧，好學(xué)不倦。山伯與喬裝的英臺(tái)在城內(nèi)遇上，惺惺相惜義結(jié)金蘭，來到書院后，曾救他們的俠士路秉章亦前來求學(xué)，三人結(jié)為知己。英臺(tái)屢次險(xiǎn)被山伯發(fā)現(xiàn)其為女兒身，巧施妙計(jì)脫離。為掩人耳目，英臺(tái)只好接受書院夫子程雍之女兒丁香的愛意。未料，山伯再次撞破英臺(tái)扮回女裝之身，山伯又被妙計(jì)所騙，但對(duì)英臺(tái)的美貌留下深刻印象。
程雍向英臺(tái)提親被拒，丁香落落寡歡，執(zhí)意尋死，英臺(tái)有告知真相，丁香一時(shí)無法接受，但在情緒平復(fù)后，二人化為姊妹之情。祝威酒醉后無意向宜興府太守馬俊升之子馬文才道出其妹英臺(tái)秀麗脫俗，女扮男裝到書院讀書之事，使文才對(duì)英臺(tái)起了好奇之心。
文才轉(zhuǎn)來尼山書院讀書，乍見英臺(tái)雖女扮男裝，卻是俊秀脫俗，屢藉機(jī)親近，一次，更于英臺(tái)沐浴時(shí)，趁機(jī)潛入，迫英臺(tái)就范，英臺(tái)卻言文才若要強(qiáng)占己身，但此心仍屬山伯，文才暫且放過英臺(tái)。文才表面裝作友善，為英臺(tái)保守秘密，內(nèi)里妒火中燒，多次伺機(jī)陷害山伯。山伯中計(jì)險(xiǎn)送命，與英臺(tái)反而因患難而加深情誼。秋圍試舉揭榜，山伯高中魁首。英臺(tái)、山伯均得回鄉(xiāng)，英臺(tái)暗示要山伯盡快來祝家提親，迎娶九妹，山伯似懂非懂，直至師母言明英臺(tái)身份，山伯才恍然大悟，待發(fā)派官職后，立往祝府提親。
山伯偕母喜孜孜地來祝府提親，未料卻驚見公遠(yuǎn)夫妻竟是殺害山伯生父的仇人，梁母拉了山伯立刻離開祝家，梁母深怕二十多年的冤怨再起，遺害山伯前程，不愿說明。公遠(yuǎn)力阻英臺(tái)與山伯見面，積極推動(dòng)與馬家親事，并深鎖英臺(tái)于閨房?jī)?nèi)。
梁母見山伯非英臺(tái)不娶，遂道出其身世，山伯原是姓趙，其父趙慶平為馬俊升、祝公遠(yuǎn)聯(lián)手殺害，山伯驚聞，決心重審二十多年前的殺父血案。英臺(tái)獲悉山伯義斷情絕之意傷慟不已，懸梁自盡，幸及時(shí)獲救。山伯夾在愛與恨之間，亦感矛盾痛苦。山伯知?dú)⒏钢鹑邱R家一手策劃，欲法辦馬俊升，未料文才棋高一著，先一步扣山伯以貪污罪嫌。英臺(tái)求救山伯，被迫答應(yīng)文才。為除后患，文才暗中用殺手取山伯性命，梁母為保山伯而身受重傷，山伯亦奮不顧身保護(hù)母親，其孝心感動(dòng)殺手，因而放梁家一條生路。山伯巧遇英臺(tái)，英臺(tái)執(zhí)意將梁母帶回祝家療傷。不料，被公遠(yuǎn)發(fā)現(xiàn)，文才欲親自解決二人，幸梁家得以逃離。
英臺(tái)在成親前夕，竟與梁家一同患難，深感一切皆為天意。山伯與英臺(tái)得到梁母與祝母的認(rèn)同，躲在荒廢的尼山書院。山伯與英臺(tái)在書院內(nèi)舉行簡(jiǎn)單的婚禮，后得知丁香被趙中書所害而淪落風(fēng)塵，決定設(shè)法贖出丁香。英臺(tái)喬裝回祝家拿錢，與祝母不勝感慨。英臺(tái)回祝家之事被文才知道，并跟蹤至尼山書院，幸山伯英臺(tái)順利逃脫，但文才繼續(xù)窮追不舍。
文才帶兵追捕，危急關(guān)頭，已成為征西大將軍的路秉章出現(xiàn)解救了他們，并將文才定罪，押解進(jìn)京。趙中書假傳圣旨，救下文才。文才立即帶人趕往尼山書院，把山伯打成重傷，棄置荒野，后被丁香救回梁家。文才擄回英臺(tái)將其玷污，發(fā)現(xiàn)英臺(tái)非完璧之身，盛怒之下將其痛打，并丟在祝家門口。英臺(tái)遭此巨變，神智錯(cuò)亂，六親不認(rèn)，只對(duì)山伯有好感。一日，山伯為英臺(tái)試穿梁母所做的新衣，觸動(dòng)了英臺(tái)的記憶，神智恢復(fù)。兩家一笑泯恩仇，山伯擇日前來迎娶。
祝威出差回到江南，認(rèn)為文才能助他青云直上，要英臺(tái)嫁入馬家，遂向文才告密英臺(tái)神智恢復(fù)。祝父母被文才抓走，而山伯英臺(tái)等則逃離，丁香自愿前去與文才交涉，謊稱山伯與梁母丟下英臺(tái)徑自逃命，英臺(tái)心死，愿意嫁與文才為妻，救回祝父母。豈料文才發(fā)現(xiàn)新娘乃是丁香假扮，攔下了正欲逃走的山伯、英臺(tái)等人。文才抓住英臺(tái)，將山伯毒打至死。英臺(tái)與山伯是否從此陰陽相隔，難道兩人最終只能含冤化蝶。